Analýza intaktní hmoty proteinů

Přehled metody

Určení molekulové hmoty celých proteinů pomocí ESI-TOF. Tato analýza umožňuje ověřit hmotu celého proteinu, identifikaci a relativní kvantifikaci kovalentních modifikací, případně pozorovat štěpné produkty degradace proteinů. Běžně provádíme měření například protilátkových konjugátů, modifikovaných histonů nebo čerstvě exprimovaných proteinů pro ověření jejich hmoty. Tato analýza může sloužit jako přesnější alternativa k SDS-PAGE.

Kontaktní osoba: František Filandr

Příklad analýzy intaktní hmoty těžkého řetezce protilátkového konjugátu s variabilní mírou konjugace malou molekulou

Požadavky:

  •    Co možná nejčistší protein v roztoku
  •    Lze použít libovolný pufr, který neobsahuje detergenty, nebo nadměrné množství solí (>250 mM)
  •    Převedení proteinu do 100-200 mM octanu amonného může zvýšit kvalitu dat
  •    Sekvence proteinu
  •    List očekávaných hmot a modifikací
  •    Přesné složení pufru, ať víme jaké kontaminanty očekávat

Výsledky:

  •     List hmot, které ve vzorku nacházíme a jejich relativní poměr v rámci daného vzorku. V případně čistého proteinu to bude například jedna dominantní hmota. V případě modifikovaných proteinů to může být několik různých hmot podle populací forem proteinu ve vzorku.
  •     Výsledky ve formě .html reportu ze softwaru UniDec (nalezené hmoty, jejich relativní zastoupení, přesnost určení hmoty, grafické zobrazení)
  •     Výsledky ve formě textového souboru obsahujícího koordináty dekonvoluovaného hmotnostního spektra (je možné otevřít v programu mMass, k dispozici na vyžádání)
  •     Interpretace dat podle informací dodaných v reQuestu

Očekávaná dodací lhůta:

  •     Do 24 hodin

Pro založení žádosti o analýzu intaktní hmoty použijte požadavkový systém reQuest (link zde).